胎牛血清選擇及使用常見(jiàn)問(wèn)題解析

1、實(shí)驗室如何選擇適合的血清?

在國內*的血清是GIBCO和HYCLONE，度和使用范圍非常普遍，但是價(jià)格普遍偏貴。life-ilab這個(gè)品牌是李記生物的自主品牌，國外直接貼牌，在20多個(gè)品牌中選擇質(zhì)量、批間差異小的大量采購，很大程度降低批次間差異。研發(fā)小組及廣大的科研客戶(hù)使用反饋效果很好，價(jià)格實(shí)惠！對于特殊的細胞李記生物采購GIBCO或HYCLONE血源，同樣經(jīng)過(guò)檢測，用實(shí)在的實(shí)驗數據確定采購批次，而不是迷信品牌。

2、胎牛血清和小牛血清的區別及注意事項？

    來(lái)源不同：新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14天的小牛，而胎牛血清(FBS)是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過(guò)心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清。

組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長(cháng)因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，

使用濃度不同：一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

注意事項：某些細胞必需胎牛血清才能生長(cháng)，而有些細胞只需小牛血清即可。

3、怎樣儲存和解凍血清避免產(chǎn)品質(zhì)量受損?

    首先需要將血清產(chǎn)品從冷凍箱中取出，先放置于2～8℃冰箱使之溶解，然后放在室溫中使之全融。在融解過(guò)程中需要不定時(shí)的輕微晃動(dòng)，使血清成分均勻，減少融化過(guò)程中產(chǎn)生沉淀機會(huì )。

    其次，血清長(cháng)時(shí)間存放于2-8℃時(shí)，可能會(huì )聚集各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)而形成沉淀或可見(jiàn)的混濁。因此，我們推薦長(cháng)期儲存血清需在-20℃以下，并避免反復凍融。

    后，若短期使用存放于4℃時(shí)，請勿超過(guò)一個(gè)月。若在實(shí)驗中血清未能一次用完一瓶血清，建議無(wú)菌分裝血清至恰當的滅菌容器內（由于血清結凍時(shí)體積會(huì )增加約10%，必須預留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形），再放回冷凍。

4、血清中包含絮狀沉淀是什么？怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。融化過(guò)程產(chǎn)生沉淀是正常特性，不會(huì )影響產(chǎn)品性質(zhì)。想要去除這些絮狀沉淀物，有兩種方法：1、可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內，以400g稍微離心,上清液即可接著(zhù)加入培養基內一起過(guò)濾(一般不建議采用過(guò)濾的方法除去沉淀，因為沉淀會(huì )堵塞濾膜而無(wú)法過(guò)濾)。2、將血清小心的轉移到另一個(gè)無(wú)菌瓶里，大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì )再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會(huì )自然消失。

5、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

(1)在2～8℃解凍血清時(shí)，請將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。同樣原理，分裝凍存的時(shí)候，須輕微的均勻搖晃，避免產(chǎn)生氣泡，使溫度與成分均一！

(2)勿直接由-20℃直接放置于37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結而發(fā)生沉淀。

(3)勿將血清置于37℃太久，否則血清會(huì )變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩定的成份也會(huì )因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

(4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。

(5)若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì )造成沉淀物的增多。

6、培養基中添加了血清和抗生素后，可長(cháng)期保存嗎?

    一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時(shí)，應該在兩到三周內使用完它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。

7、為什么要熱滅活血清?

     事實(shí)上，大部分細胞培養不需要滅火血清，僅在培養部分特殊細胞時(shí)進(jìn)行滅火。如在免疫學(xué)研究，培養ES細胞、平滑肌細胞等特殊細胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。因為加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。

8、有必要做熱滅活嗎?

在大多數情況下不需要熱滅活處理，不但節省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!因為經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的行程會(huì )顯著(zhù)的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀(guān)察會(huì )發(fā)現有很多的“小黑點(diǎn)”，常常會(huì )讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì )使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

9、血清需要做支原體檢測嗎

支原體污染是世界性問(wèn)題，有報道指出，支原體輕微污染即可影響200多個(gè)基因的表達，Nature雜志從2013年起，要求涉及細胞培養的研究，必須進(jìn)行支原體檢測。李記生物每批次血清均用支原體檢測試劑進(jìn)行檢測，可以檢出99.9%的已發(fā)現支原體種類(lèi)，客戶(hù)不需要另外檢測，但我們仍然強烈建議培養細胞中定期進(jìn)行支原體檢測，以排除實(shí)驗操作中人為帶入支原體污染。