如何避免胎牛血清使用時(shí)出現黑點(diǎn)

　　在細胞培養過(guò)程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，最常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜，影響后續實(shí)驗的結果，我們在實(shí)驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養293T細胞，效果非常好。但是有些細胞也會(huì )使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據具體細胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。

　　為防止客戶(hù)由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對此一定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細胞培養順利。

　?。?）盡可能地減少血清凍融次數。

　?。?）培養基無(wú)需37℃水浴。

　?。?）培養基保持PH值7.0-7.2。

　?。?）嚴格控制配制培養基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

　?。?）掌握細胞傳代的時(shí)機，細胞切勿生長(cháng)過(guò)老。

　　1、化凍將血清從-20度冰箱中取出，室溫（或浸于自來(lái)水中）化凍（約需要30分鐘至2小時(shí)，也可放于4度冰箱化凍過(guò)夜；化凍后若不馬上滅活，可以放入4度冰箱中暫時(shí)保存）

　　2、滅活

　?。?）放入室溫的水浴鍋內開(kāi)始加熱（同時(shí)放入一個(gè)空的血清瓶，內裝100ml自來(lái)水，插入一根溫度計，溫度監控以此為準）

　?。?）當溫度計顯示56度時(shí)，停止加熱，改為間斷加熱，維持56度（±0.5度）30分鐘（±3分鐘；若不小心使溫度上升超過(guò)56度，則：若仍未超過(guò)60度，且時(shí)間很短，比如不超過(guò)5分鐘，則仍可使用；若超過(guò)60度，或者時(shí)間較長(cháng)，則棄去不用，或者嘗試用于一些普通細胞的培養）

　?。?）取出，自然冷卻至室溫（約需1-3小時(shí)），可分裝或-20度繼續凍存。

　　3、分裝

　?。?）轉入無(wú)菌間，在超凈臺內將血清分裝入10ml離心管中（注意預先要將血清輕輕搖動(dòng)數周、混勻；用吸液管或吹大管吹出血清時(shí)要注意：不要吹出氣泡（血清很粘稠，很容易產(chǎn)生氣泡；如果產(chǎn)生氣泡，則在酒精燈火焰上過(guò)一下））

　?。?）放入-20度冰箱凍存

　?。?）全部操作約需要4-6小時(shí)