化學(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統和化學(xué)發(fā)光分析系統

　　在常溫下由化學(xué)反應產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過(guò)躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導至的發(fā)光現象?；瘜W(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過(guò)程。

　　學(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來(lái)在世界范圍內發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應結合起來(lái)建立的微量測定技術(shù)，因此該技術(shù)靈敏度高、線(xiàn)性范圍寬、應用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比，操作簡(jiǎn)便、反應快速、無(wú)放射污染，儀器簡(jiǎn)單穩定且可以實(shí)現自動(dòng)化。

　　化學(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統和化學(xué)發(fā)光分析系統。

　　免疫分析系統是指：抗原抗體標記化學(xué)發(fā)光物質(zhì)或酶，經(jīng)過(guò)抗原與抗體反應形成抗原-抗體免疫復合物。

　　化學(xué)發(fā)光分析系統是指在免疫反應結束后，利用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個(gè)激發(fā)態(tài)的中間體，這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩定的基態(tài)時(shí)，同時(shí)發(fā)射出光子，利用發(fā)光信號測量?jì)x進(jìn)行檢測。根據化學(xué)發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關(guān)系，可利用標準曲線(xiàn)計算出被測物的含量。

　　ECL化學(xué)發(fā)光法是目前常用、靈敏的WesternBlot檢測方法。由于這些底物不會(huì )在膜表面沉淀、牢牢結合在膜上，因此可以通過(guò)一抗二抗去除液(Strippingbuffer)將親和結合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強烈而有效解離結合的抗體，也要足夠溫和使轉移的目標蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上。通過(guò)使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過(guò)的膜檢測其它蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE膠相比，不僅省時(shí)省力，而且可以消除重新上樣而帶來(lái)的誤差，使可比性更強。