影響細胞轉染效率的因素有哪些？

　　細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術(shù)。隨著(zhù)分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中，其應用越來(lái)越廣泛。

　　影響細胞轉染效率的因素有哪些？

　　1.轉染試劑的選擇

　　不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實(shí)驗的需要，因此在轉染實(shí)驗前應根據實(shí)驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。

　　每種轉染試劑都會(huì )提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻，通過(guò)這些資料可選擇適合實(shí)驗設計的轉染試劑。當然，適合的是高效、低毒、方便、廉價(jià)的轉染試劑。

　　2.細胞狀態(tài)

　　一般低的細胞代數（<50）能確?；蛐筒蛔?。適合轉染的細胞是經(jīng)過(guò)幾次傳代后達到指數生長(cháng)期的細胞，細胞生長(cháng)旺盛，最容易轉染。

　　細胞培養在實(shí)驗室中保存數月和數年后會(huì )經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會(huì )導致和轉染相關(guān)的細胞行為的變化。也就是說(shuō)同一種系的細胞株，在各實(shí)驗室不同培養條件下，其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變，導致其轉染特性也發(fā)生變化。

　　因此，如果發(fā)現轉染效率降低，可以試著(zhù)轉染新鮮培養的細胞以恢復結果。

　　3.轉染方法

　　轉染時(shí)應根據具體轉染試劑推薦的方法進(jìn)行，但也要根據實(shí)驗室的條件來(lái)確定轉染條件。

　?。?）細胞培養物

　　推薦在轉染前24小時(shí)分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌，支原體或真菌的污染。

　?。?）細胞密度

　　細胞密度對轉染效率有一定的影響。如果選用新的細胞系或者新的轉染試劑，最好能夠進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗并為以后的實(shí)驗建立一個(gè)穩定方法，包括適當的接種量和培養時(shí)間等等。

　?。?）血清

　　對于主流的轉染試劑來(lái)說(shuō)，血清的存在不會(huì )影響轉染效率，甚至還有助于提高轉染效率。

　　不過(guò)要特別注意：對于RNA轉染，如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關(guān)注的。

　　胎牛血清經(jīng)常用到，便宜一點(diǎn)的有馬或牛血清。通常的，血清是一種包含生長(cháng)因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長(cháng)作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響細胞生長(cháng)，因此也會(huì )影響轉染效率。新加培養基的預熱對細胞轉染很有幫助。

　?。?）氮磷（N/P）比

　　N/P比是轉染效率的關(guān)鍵（為了換算方便，一般以DNA/轉染試劑質(zhì)量比表示），在一定比例范圍內轉染效率隨N/P比成比例增高，之后達到平值，但毒性也隨之而增加，因此在實(shí)驗之前應根據推薦比例，確定本實(shí)驗的最佳轉染比例。

　?。?）DNA質(zhì)量

　　DNA質(zhì)量對轉染效率影響非常大。應盡可能提高DNA的純度。