提高細胞轉染效率的方法有哪些？

　　轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。分為物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍?zhuān)换瘜W(xué)介導方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導的技術(shù)；生物介導方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉染，和現在比較多見(jiàn)的各種病毒介導的轉染技術(shù)。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導的轉染技術(shù)，是目前轉染效率較高的方法，同時(shí)具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類(lèi)型有很強的選擇性，在一般實(shí)驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導的轉染方法，則各有其特點(diǎn)。

　　提高細胞轉染效率的方法有哪些？

　　1．選擇合適的轉染試劑

　　不同細胞系轉染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據實(shí)驗的需要，因此在轉染實(shí)驗前應根據實(shí)驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會(huì )提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻，通過(guò)這些資料可選擇適合實(shí)驗設計的轉染試劑。當然，適合的是高效、低毒、方便、廉價(jià)的轉染試劑。

　　2．保持佳的細胞狀態(tài)

　　一般低的細胞代數（<50）能?；蛐筒蛔?。適合轉染的細胞是經(jīng)過(guò)幾次傳代后達到指數生長(cháng)期的細胞，細胞生長(cháng)旺盛，容易轉染。細胞培養在實(shí)驗室中保存數月和數年后會(huì )經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會(huì )導致和轉染相關(guān)的細胞行為的變化。也就是說(shuō)同一種系的細胞株，在各實(shí)驗室不同培養條件下，其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變，導致其轉染特性也發(fā)生變化。因此，如果發(fā)現轉染效率降低，可以試著(zhù)轉染新鮮培養的細胞以恢復較佳結果。

　　3．選擇高效的轉染方法

　　不同轉染試劑有不同的轉染方法，但大多大同小異。轉染時(shí)應跟據具體轉染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實(shí)驗室培養的細胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉染效果可能不同，應根據實(shí)驗室的具體條件來(lái)確定較佳轉染條件。

　　4．所構建載體的質(zhì)量。

　　轉染載體的構建（病毒載體，質(zhì)粒DNA，RNA，pcr產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉染結果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問(wèn)題（如基因污染）。除載體構建外，載體的形態(tài)及大小對轉染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線(xiàn)性DNA對瞬時(shí)和穩定轉染的影響。如果基因產(chǎn)物對細胞有毒性作用，轉染也很難進(jìn)行，因此選擇組成或可調控，強度合適的啟動(dòng)子也很重要，同時(shí)做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。