RNA的提取方法總結

　　這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。
 

　　1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法
 

　　原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細胞染色體DNA.
 

　　本法對于冷凍時(shí)間長(cháng)、細胞質(zhì)和細胞核不易分離的組織標本以及富含RNA酶的組織細胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物細胞RNA的常規方法。其缺點(diǎn)是操作復雜、流程長(cháng)，一次提取的樣品數量有限。
 

　　2、鹽酸胍-有機溶劑法
 

　　本法有MacDonald 1987年在Strohman報道的方法基礎上改進(jìn)而成的，適用于沒(méi)有超速離心及設備的情況下提取細胞總RNA。它利用鹽酸胍抑制RNA酶，勻漿裂解細胞，有機溶劑抽提去除蛋白質(zhì)，通過(guò)選擇性沉淀RNA分子而去除DNA，提取的RNA質(zhì)量較好，但整個(gè)操作過(guò)程繁雜費時(shí)。
 

　　3、氯化鋰-尿素法
 

　　本法首先由Auffray報道，利用高濃度尿素變性蛋白質(zhì)同時(shí)抑制RNA酶，3mol/L LiCl選擇性沉淀RNA。其缺點(diǎn)是有時(shí)會(huì )存在DNA污染，LiCl沉淀RNA會(huì )丟失一些小分子量的RNA，如5S RNA等。優(yōu)點(diǎn)是快速簡(jiǎn)捷，尤其適用于大量樣品少量組織細胞的RNA提取，其質(zhì)量可以滿(mǎn)足Northern分析，Oligo(dT)提取mRNA，SI核酸酶或RNase保護實(shí)驗等。本法每提取107個(gè)細胞能提取總RNA約10?g。
 

　　4、熱酚法
 

　　本法主要用于少量細胞樣品RNA提取，其產(chǎn)量不高，但簡(jiǎn)單易行。
 

　　5、快速提取法
 

　　本法主要用于培養細胞，通過(guò)0.5%SDS裂解細胞，酚抽提去除蛋白質(zhì)和DNA沉淀，快速純化RNA。
 

　　6、細胞質(zhì)RNA提取法
 

　　本法主要適用于培養細胞，首先去除細胞核，然后用蛋白酶K消化蛋白質(zhì)，酚/氯仿抽提去除蛋白質(zhì)。操作簡(jiǎn)單，同時(shí)能進(jìn)行多個(gè)樣品操作，多數步驟在室溫下進(jìn)行，提取的RNA質(zhì)量較高，可滿(mǎn)足體外無(wú)細胞翻譯系統、cDNA合成、引物延伸以及核酸酶SI保護實(shí)驗。本法提取的RNA產(chǎn)量一般為30～500?g/107個(gè)細胞。
 

　　7、酚-氯化鋰法同時(shí)提取細胞RNA和DNA
 

　　本法是在Elion和Warner報道的方法基礎上，有Sandeep等人于1990年改進(jìn)而成。它通過(guò)酚和SDS裂解細胞，變性，解聚蛋白，抑制RNase，并用EDTA保護DNA，最后根據RNA和DNA在Li+中的不同沉淀速度，而分離DNA和RNA。整個(gè)過(guò)程在2小時(shí)內完成。RNA可用于Northern分析，DNA可用于內切酶消化以及Southern雜交實(shí)驗。
 

　　8、一步快速熱酚抽提法
 

　　基于Shomczynki和Sacchi兩人于1987年報道的RNA快速提取法，美國Promega公司有機地將這些試劑組合成總RNA試劑盒，使操作更為簡(jiǎn)單方便，并突出體現以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
 

　　1)將已知的RNase抑制劑異硫氰酸胍、b-巰基乙醇和去污劑N-十二烷基肌氨酸鈉聯(lián)合使用，抑制了RNA的降解，增強了對核蛋白復合物的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離進(jìn)入溶液，提高了RNA的提取產(chǎn)量；
 

　　2)RNA選擇性地進(jìn)入無(wú)DNA和蛋白質(zhì)的水相，容易被異丙醇沉淀濃縮，對大量或少量組織的細胞RNA提取，均甚合適；
 

　　3)可在3小時(shí)以?xún)忍幚泶罅繕悠?，省略了氯化銫密度梯度超速離心步驟及其它方法使用的長(cháng)時(shí)間選擇性乙醇沉淀或LiCl沉淀。LiCl沉淀不但會(huì )導致小RNA(<5.8S)的丟失，而且Li+鹽的殘留還會(huì )抑制DNA的合成反應。