標記二抗的選擇及應用實(shí)例

　　標記二抗的作用：
 

　　二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標簽。由于標記二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在免疫學(xué)實(shí)驗中得以應用廣泛，如western blot(通過(guò)與特異性抗體結合來(lái)鑒定蛋白質(zhì))，ELISA，免疫組織化學(xué)(檢測組織中的特異性抗原)，免疫細胞化學(xué)(通過(guò)免疫學(xué)方法檢測細胞的抗原組成)，流式細胞術(shù)及免疫沉淀(通過(guò)抗原與抗體的特異性結合作用來(lái)分離相應抗原)。
 

　　二抗針對某一特定物種(如小鼠)的所有抗體均具有特異性，因而使用標記二抗可以免去對每一個(gè)一抗進(jìn)行標記，大大節省了時(shí)間和費用;此外，一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結合幾個(gè)二抗分子，從而使信號大大增強，提高了實(shí)驗靈敏度。
 

　　標記二抗可以耦聯(lián)有幾種不同的標記，可以是酶，熒光素，或生物素。
 

　　標記二抗的選擇：
 

　　通常情況下，某一特定的實(shí)驗中可能同時(shí)有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到該實(shí)驗的二抗，需要綜合以下幾個(gè)方面進(jìn)行考慮：
 

　　一抗的物種來(lái)源
 

　　一抗是在什么物種來(lái)源的，相應的二抗也要是抗該物種的抗體。例如，如果一抗是在小鼠體內制備的，那么你就應當選擇抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔體內制備的，那么二抗就應當是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動(dòng)物中制備的對二抗的質(zhì)量并無(wú)明顯的影響。
 

　　一抗是屬于哪個(gè)類(lèi)或亞類(lèi)
 

　　二抗需與一抗的類(lèi)別或亞類(lèi)相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類(lèi)免疫球蛋白，因此相應的標記二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類(lèi)別及亞類(lèi)通常會(huì )在產(chǎn)品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗體。
 

　　如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(lèi)(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，或者你也可以選擇專(zhuān)門(mén)針對這一亞類(lèi)的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么二抗在雙標記實(shí)驗中尤其適合。
 

　　如果你不知道一抗是哪一類(lèi)別或亞類(lèi)，那么抗小鼠IgG是一個(gè)不錯的選擇，因為此種抗體可以識別大多數類(lèi)型的IgG免疫球蛋白。
 

　　標記二抗應用實(shí)例分析
 

　　為分析標記二抗的使用情況，我們隨機抽取了100篇2007年或2008年發(fā)表于Science 或 Journal of Biological Chemistry雜志上的 文章(英文)，這些文章涵蓋了來(lái)自于16個(gè)國家的約80個(gè)研究機構。收集的數據顯示二抗的使用非常廣泛，可以應用到幾乎所有類(lèi)型的免疫檢測中，尤其是Western blot、免疫組織化學(xué)和免疫細胞化學(xué)。事實(shí)上，二抗在ELISA及流式細胞術(shù)中應用也很廣泛，不僅用于科學(xué)研究，而且廣泛的應用于臨床分析和疾病診斷。比較而言，二抗在免疫沉淀中的應用相對較少。以下內容是基于對所收集的二抗信息進(jìn)行統計分析后得出的一些結論，對于您在具體的實(shí)驗中如何選擇的抗體具有借鑒作用。
 

　　選擇二抗時(shí)，您必須考慮到以下因素，如一抗的物種、產(chǎn)生二抗的宿主、一抗的類(lèi)別或亞類(lèi)、二抗所耦聯(lián)的探針類(lèi)型及二抗的形式(如整個(gè)IgG分子，F (ab’) 2片段，或Fab片段)等等。因此選擇哪種類(lèi)型的二抗很大程度上決定于您所使用的一抗是什么，尤其針對種屬和類(lèi)別而言。通常情況下，一抗可以在山羊、小鼠、兔子、大鼠及綿羊體內制備，其中屬小鼠及兔子zui為常見(jiàn)，相應的，標記二抗的種屬也應當與一抗的相一致。而對于制備二抗的宿主，則應選擇另外一種不同的動(dòng)物，一般選用驢、山羊、兔子、綿羊或其他較大的動(dòng)物，可以實(shí)現二抗的大規模制備，其中又屬山羊使用zui多。
 

　　對于二抗類(lèi)別或亞類(lèi)的選擇，應遵循與一抗類(lèi)別或亞類(lèi)相一致的原則，其中抗IgG使用zui多。這可能是因為除了五種類(lèi)別的單克隆抗體外，很多一抗是多克隆抗體，屬于IgG類(lèi)免疫球蛋白。此外anti-IgG可以識別幾乎所有類(lèi)型的IgG亞類(lèi)，因此，在不清楚一抗是屬于那個(gè)類(lèi)別或亞類(lèi)的時(shí)候，anti-IgG抗體是個(gè)不錯的選擇。從我們的數據來(lái)看，值得注意的是， IgG亞類(lèi)特異性的二抗(如抗IgG1，抗IgG2，抗IgG2a，抗IgG2b)通常用于雙標記實(shí)驗中，包括免疫細胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)及流式細胞術(shù)。
 

　　此外，整個(gè)IgG分子是zui常用的一種二抗分子形式，而F (ab’) 2片段或Fab片段一般僅用于特殊實(shí)驗中，如需要避免抗體與具有Fc受體的細胞結合的情況，或需要封閉內源性免疫球蛋白的時(shí)候。