凋亡檢測試劑盒 · 介紹

[產(chǎn)品] Annexin V-FITC/PI 細胞凋亡檢測試劑盒

[貨號] AC12L033

[規格] 100T

1. 細胞凋亡簡(jiǎn)單介紹

細胞凋亡又稱(chēng)程序性細胞死亡，是一種正常的生理過(guò)程，這種細胞死亡方式與細胞壞死不同，他不會(huì )引起機體的炎癥反應。細胞凋亡在機體內受到高度調節，旨在犧牲特定細胞為生物體謀取更多益處，細胞凋亡廣泛存在于生長(cháng)發(fā)育和衰老的各個(gè)環(huán)節中，有時(shí)也作為一種防御機制。

細胞凋亡過(guò)程中，細胞具有典型的形態(tài)學(xué)特征：第1階段中（持續時(shí)間很短）細胞的間接觸消失，但胞膜尚完整，粗面內質(zhì)網(wǎng)上的核糖體脫落，細胞核出現固縮；第2階段中細胞核碎裂后與細胞內的各種細胞器結合，并進(jìn)一步被質(zhì)膜包裹形成凋亡小體；第3階段中吞噬細胞吞噬凋亡小體，將其消化并重新供機體使用。

2. 細胞凋亡信號通路

細胞凋亡的途徑主要有兩種且相互關(guān)聯(lián)，外源性或死亡受體途徑、內在性或線(xiàn)粒體途徑。外源性途徑涉及跨膜受體介導的相互作用，當細胞表面的死亡受體（FAS受體）被激活，啟動(dòng)半胱天冬酶（Caspase）級聯(lián)反應，該反應能導致細胞死亡；而內在途徑直接在細胞內啟動(dòng)，由線(xiàn)粒體釋放促凋亡蛋白（SMAC和細胞色素C），從而激活半胱天冬酶，導致細胞凋亡。

3. 細胞凋亡如何檢測（基于生物學(xué)功能、生化標記方法）

（1）Annexin V-FITC/PI檢測法

磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）為帶負電荷的磷脂，位于正?；罴毎毎ぶ|(zhì)雙層的內側，細胞凋亡早期 PS 發(fā)生外翻，暴露于細胞膜外側。Annexin V(AV)是一種分子量約為36 kDa 的Ca2+依賴(lài)性磷脂結合蛋白，與PS有高度親和力，因此利用FITC標記的AV蛋白可以結合細胞膜外側的PS，用于指示早期凋亡細胞。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一種核酸染料，PI 無(wú)法通過(guò)正常的細胞膜或早期凋亡的細胞膜, 但可以透過(guò)凋亡中晚期細胞或者壞死細胞的細胞膜并對細胞核進(jìn)行染色，用以區分存活的早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞以及壞死細胞。

因此FITC-Annexin V 與PI 雙染方法可以將處于不同凋亡時(shí)期的細胞區分開(kāi)。

（2）JC-1 線(xiàn)粒體膜電位檢測

線(xiàn)粒體膜電位降低是細胞早期凋亡的一個(gè)標志，當線(xiàn)粒體膜通透性發(fā)生改變時(shí)，膜電位會(huì )降低。JC-1 是一種廣泛用于檢測線(xiàn)粒體膜電位△ Ψm 的理想熒光探針，在線(xiàn)粒體膜電位較高時(shí)，產(chǎn)生紅色熒光；在線(xiàn)粒體膜電位較低時(shí)，產(chǎn)生綠色熒光。

（3）TUNEL檢測法

細胞凋亡的一個(gè)顯著(zhù)特點(diǎn)是細胞染色體 DNA 的降解，這種降解非常特異并有規律，所產(chǎn)生的不同長(cháng)度的 DNA 片段約為 180 bp-200 bp 的整數倍，表現為瓊脂糖凝膠電泳中呈現特異的梯狀 Ladder 圖譜。

TUNEL 法可以選擇性的對凋亡細胞直接進(jìn)行原位檢測， 而非壞死細胞或因輻照和藥物治療而造成的 DNA 鏈斷裂的細胞，是一種更快速、直接的檢測手段。

（4）凋亡相關(guān)分子檢測法

在半胱天冬酶家族中，Caspase-1、3、7和8主要參與細胞凋亡過(guò)程。測量活細胞中的 Caspase 1 活化能夠檢測細胞凋亡。Caspase-3 具有特異性的底物多肽識別序列，通過(guò) Caspase 3 作用，斷裂 Rh 110 多肽，產(chǎn)生具有強烈綠色熒光的 Rh 110。Caspase-8由CASP8基因所編碼，已被證明具有底物選擇性，通過(guò) Caspas-8 的切割 R110 肽產(chǎn)生強綠色熒光。

（5）DNA染色檢測法

Hoechst 33258 和Hoechst 33342是一種低細胞毒性的穿透細胞膜的藍色熒光染料。Hoechst 33258 為特異性 DNA 染料，與 A-T 鍵結合，這種染料對死細胞或經(jīng)70%冷乙醇固定的細胞可立即染色，而活細胞的著(zhù)色是漸進(jìn)性的，在 10 min 內可達飽和。在熒光顯微鏡下，活細胞核呈彌散均勻熒光，出現細胞凋亡時(shí)，細胞核或細胞質(zhì)內可見(jiàn)濃染致密的顆粒塊狀熒光。

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