使用膠原酶的時(shí)候要注意些什么？

　　膠原酶（collagenase）是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬，內含較多結締組織或膠原成分時(shí)，用胰蛋白酶解離細胞的效果較差，這時(shí)可采用膠原酶解離細胞法。 膠原酶僅對細胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml（約為1mg/mL）或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶，要根據所要分離消化的組織類(lèi)型選擇膠原酶類(lèi)型。

　　膠原酶的配置

　　膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制、消毒滅菌和儲藏。 　　注意： 　　因為Ⅰ型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過(guò)濾，因此可以用蔡式濾器過(guò)濾除菌。 　　鈣、鎂離子和血清成分不會(huì )影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養液配制。

　　膠原酶的使用

　　1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小塊

　　2.將組織塊放入離心管（三角燒瓶）中加入30~50倍體積的膠原酶溶液，旋緊蓋子（密封燒瓶）。

　　3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內，每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。消化時(shí)間與組織的類(lèi)別很有關(guān)系，對于某些腫瘤組織或其他較致密結締組織，消化時(shí)間4~48h，對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動(dòng)即成細胞團或單個(gè)細胞，可以認為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后，由于上皮細胞對此酶有耐受性，可能仍有一些細胞團未*分散，但成團的上皮細胞比分散的單個(gè)上皮細胞更易生長(cháng)，因此，如無(wú)特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理。

　　4.收集消化液（有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒(méi)有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過(guò)濾），離心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者無(wú)血清培養液離心漂洗1~2次，去除上清，加培養液制成細胞懸液，接種培養瓶。