Pikogreen dsDNA定量試劑盒（超敏）

Pikogreen dsDNA定量試劑盒 (超敏)

產(chǎn)品描述
　　Pikogreen dsDNA 定量試劑盒（Pikogreen HighSensitivity dsDNA Quantitation Kit）不同于常規的基于吸光度的測量，這款試劑盒可以區分dsDNA、ssDNA或RNA，有選擇性地檢測dsDNA（見(jiàn)圖1）。與傳統DNA定量方法相比，該產(chǎn)品具有檢測范圍廣、高靈敏度、高特異性等優(yōu)點(diǎn)。試劑盒主要包含Pikogreen High Sensitivity dsDNA Quantitation Buffer, Enhancer solution以及pre-diluted dsDNA Standards三個(gè)組分，可以在200 uL體系內定量0.2~100 ng的dsDNA（見(jiàn)圖2）。此外，試劑盒還可以將其他污染物的影響降低至最小，可以耐受常規污染物例如蛋白質(zhì)，鹽，有機溶劑和洗滌劑等（見(jiàn)表1），本試劑盒不具有細胞膜通透性，沒(méi)有細胞毒性和誘發(fā)突變性，對人體安全無(wú)害。
訂購信息

產(chǎn)品組分

運輸與保存
藍冰運輸。4℃避光保存，有效期24個(gè)月。
使用方法

1. 使用前，將產(chǎn)品從儲存條件下取出恢復至室溫。如果100XEnchancer儲存液出現沉淀，可37℃水浴溶解。每個(gè)組分應充分震蕩或渦旋混勻、離心，以免造成不必要的試劑損耗。

2. 每個(gè)待測樣品對應200 μL的Pikogreen工作液。對于一個(gè)96孔板，吸取200 μL 100X Enchancer，加入到20 mL Quantitation Solution 中，渦旋混勻，配置成Pikogreen工作液，為得到最佳結果，工作液應在1 h內使用完畢。如果將工作液重新儲存并在24 h內使用，結果的準確性會(huì )有輕微損失。儲存過(guò)程中，增強液可能會(huì )出現沉淀現象，可以通過(guò)渦旋震蕩使其重懸。

3. 對于每個(gè)樣品，吸取200 μL的工作液至黑色的96孔板微孔中。為確保結果精確可靠，建議每個(gè)測試樣品和DNA標樣分別做平行的3個(gè)復孔，此過(guò)程也可以使用有精確量程的移液排槍進(jìn)行。黑色的檢測板可以減少各測試樣品間的熒光干擾。

4. 在96孔板微孔中，每孔加入10 μL的dsDNA標樣或未知樣品，并用移液器輕輕混勻。

5. 將微孔板室溫避光孵育5~10 min，為得到最佳結果，孵育結束后，應立即讀取檢測板。也可以在6 h內讀取數據，但結果的精確性會(huì )有輕微損失。

6. 使用激發(fā)波長(cháng)和發(fā)射波長(cháng)在485 nm和530 nm處的酶標儀測量熒光值。

7. 制作一條標準曲線(xiàn)，計算檢測樣品的DNA濃度（見(jiàn)圖2）。
   【注】：圖2標準曲線(xiàn)僅供參考，您可以根據實(shí)際測得的數據自制標準曲線(xiàn)，從而求算樣品的濃度。

注意事項

1. 對于要檢測的植物或動(dòng)物來(lái)源的DNA樣本，小牛胸腺DNA（Calf thymus DNA ）常常作為制作DNA標樣的參照物。因為Calf thymus DNA具有雙鏈結構、高度聚合，堿基分配均勻（AT含量58%，GC42%）。如果檢測樣品的熒光值超過(guò)了標準曲線(xiàn)，那么需要將樣品做進(jìn)一步稀釋處理。為了保持結果的一致性，務(wù)必使每孔上樣量均等，且不含有其他高濃度的污染物。
   2. Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒可以測量范圍在0.2~100 ng的dsDNA。對于一些不需要線(xiàn)性檢測的樣品，試劑盒檢測范圍可以擴展至200 ng。如需檢測更低含量的樣品，您可以將DNA標樣用1×TE緩沖液作進(jìn)一步的稀釋?zhuān)瑵舛瓤梢韵♂尩?.02 ng/μL，然后按照常規程序每孔10 μL上樣。
   3. 對于不同種類(lèi)的檢測儀器，您可以?xún)?yōu)化儀器設置，以獲取最佳線(xiàn)性度。一些可能會(huì )影響最終線(xiàn)性度和相對熒光強度的因素有：（1）激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)與帶寬（2）截止型濾波器（3）靈敏度設置（4）移液的準確性（5）微孔板制造商。為了得到最佳結果，請使用精確校準的移液器和去RNA酶的槍頭、試管以及檢測板。建議檢測時(shí)每個(gè)DNA標樣和未知樣品都設定3個(gè)復孔。如果檢測時(shí)不只一塊96孔板，建議每塊96孔板都設定一條標準曲線(xiàn)，盡量減少檢測板之間的誤差。
   表1：常見(jiàn)的DNA污染物對 Pikogreen High Sensitivity dsDNA 定量試劑盒的影響

【注】：3份dsDNA平行樣品的標準曲線(xiàn)，分別在上述含有特定濃度污染物的條件下（初始濃度進(jìn)行檢測，“Pass"指與沒(méi)有污染物的體系相比較，實(shí)驗結果變化范圍<20%。所有樣品用Molecular DevicesGemini XS酶標儀在485 nm處激發(fā)，在530 nm處測熒光強度?！?/span>Pass *"指由此條件測得的標準曲線(xiàn)有少許變動(dòng)。“dNTPs**"指dATP, dCTP, dGTP, dTTP的混合物。