Quick Cell支原體快速檢測試劑盒（細胞培養）

產(chǎn)品描述
　　Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細胞培養)是專(zhuān)門(mén)用于快速檢測細胞培養上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。本試劑盒操作簡(jiǎn)單，反應時(shí)間短，只需吸取1 μl細胞培養上清加入反應體系中，60℃孵育1h，肉眼觀(guān)察即可判定結果，與傳統檢測支原體的PCR法優(yōu)勢明顯。本試劑盒檢測范圍廣，可以檢測：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見(jiàn)的污染細胞的支原體(M.為Mycoplasma的縮寫(xiě))。以上13種支原體約占細胞支原體污染的99%以上。絕大多數支原體污染集中于前8種。因此非常適合于與細胞生物學(xué)相關(guān)的科研實(shí)驗室及企業(yè)的日常支原體檢測。【注】：快速法不能檢測尿解，肺支原體。
訂購信息

產(chǎn)品組分

【注】：①本試劑盒所指50次測試包含陰性對照、陽(yáng)性對照，并非50個(gè)樣品，因每次測試均需設置對照，測試樣品數根據實(shí)驗安排確定，理論上一次最多可測試48個(gè)樣品。②使用前用離心機輕微離心，以免管壁上粘附損失試劑減少檢測次數。 （注：陽(yáng)性支原體DNA無(wú)需離心。)
運輸與保存
藍冰運輸。-20℃保存，有效期36個(gè)月。
實(shí)驗操作流程
1.待測細胞培養上清收集
為了準確判斷細胞是否有支原體的污染，待測的細胞培養液樣品最好來(lái)源于至少培養3 d且匯合度70-90%左右的細胞培養上清(貼壁細胞)。懸浮培養的細胞也需要在換液傳代后，至少讓細胞生長(cháng)3 d再取培養液進(jìn)行檢測，哺乳動(dòng)物細胞的存在不會(huì )影響檢測結果。細胞培養上清可直接用于檢測，但樣品中如果含有EDTA等影響支原體DNA擴增的成分，建議進(jìn)行樣品處理，處理過(guò)程如下：
樣品處理：（1）根據濃縮倍數，可以取100-1500μL上述待測樣品到1.5 mL離心管內，在普通臺式離心機上1000 rpm低速離心5 min，將離心后的上清轉移到另一個(gè)離心管內，丟棄細胞沉淀。（2）將上清繼續13000 rpm（約 16000 g）高速離心 5 min，小心吸走全部上清，用 50 μL 5 mM Tris-HCl, pH 8.5（樣品可以長(cháng)期保存。推薦）或者去離子水重懸沉淀（沉淀中含有支原體），吹吸均勻（如果最初使用了1500 μL 的樣品，則支原體濃度大約提高了30倍）。（3）該重懸后的樣品可以直接檢測，也可以進(jìn)行熱處理后再檢測（熱處理后，樣品保存更穩定）。熱處理過(guò)程：95 ℃加熱處理 5 min（可以轉移到 PCR 管內，在 PCR 儀上進(jìn)行加熱處理），簡(jiǎn)單離心（1000 g，5 sec）后，取上清進(jìn)行檢測。
【注】：收集的待測細胞培養液樣品如果不立即檢測，請放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存1個(gè)月，在-80℃可以長(cháng)期保存。此外，為了節約檢測成本，可以將不同時(shí)間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存，而后一起檢測。
2.反應體系的配制
表1：恒溫反應體系的配制

（1）將溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出，室溫放置待其融化，溶液Ⅱ從-20℃冰箱中取出后置于冰上備用。溶液Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000rpm離心30 sec，用移液槍吹洗均勻。三種試劑按表1比例混合。
【舉例】：①如果待測樣品為8個(gè)（加上1個(gè)陰性和1個(gè)陽(yáng)性對照），則樣品總數為10個(gè)。溶液Ⅰ的總體積為22.5×10×1.06=238.50 μL。溶液Ⅱ的總體積為1×10×1.06=10.60 μL。溶液Ⅲ的總體積為0.5×10×1.06=5.3 μL。將溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ混合均勻即可。②如果打算一個(gè)試劑盒一次使用完畢，可以按照以下方法進(jìn)行配制：直接往整管溶液Ⅰ（1150 μL）中加入50 μL 溶液Ⅱ和25 μL溶液Ⅲ，混合均勻即可。如果一次使用完畢，一個(gè)試劑盒大概可以檢測48-49個(gè)樣品。
【注】：①總體積中多配制6%（如果覺(jué)得該比例不合適，可以自己調整），是為了防止移液誤差，以保證每個(gè)反應管中的反應液足量。②溶液Ⅰ和溶液Ⅲ使用完后，請繼續放回-20 ℃冰箱中保存。③溶液Ⅱ必須一直在-20 ℃冰箱中保存（溶液Ⅱ在-20 ℃不會(huì )凍住），不能放于室溫。④溶液Ⅱ和溶液Ⅲ開(kāi)蓋之前，請離心一下。
（2）將上述配制好的反應體系，吹打均勻后，按每管24 μL分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應液體積一樣。PCR管應該使用透明度良好的薄壁PCR管。
（3）往測試管(Test)中加入1μL待測細胞培養液；往陽(yáng)性對照管(Positive)中加入1 μL陽(yáng)性支原體DNA；往陰性對照管(Negative)中加入1μL滅菌水；反應液的總體積為25 μL。
【注】：①裝有陽(yáng)性支原體DNA的螺口管開(kāi)蓋之前，用力甩一下，或者用迷你離心機即可。
②進(jìn)行反應體系配制的房間，與進(jìn)行樣品前處理、加陽(yáng)性對照DNA、樣品DNA的房間最好分開(kāi)。

3. 反應
PCR儀設置程序：61℃，60 min；10℃，forever；熱蓋溫度，105℃。
【注】：若實(shí)驗室反應場(chǎng)所沒(méi)有PCR儀，可用水浴鍋代替，水浴鍋顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差不超過(guò)0.5℃，另須往每個(gè)反應管內加入25μL礦物油，以防止水份揮發(fā)，然后蓋上蓋子，將反應管插入帶孔的漂板內，放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內，準確反應60 min。
4. 結果判斷
61℃反應60 min后，立刻取出反應管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過(guò)反應管溶液顏色的變化，即可判斷檢測結果。如果溶液為藍綠色，則說(shuō)明有支原體污染；如果為紫紅色，則說(shuō)明沒(méi)有支原體污染(如圖1)。
【注】：如果反應60 min，陽(yáng)性對照效果不明顯，可以繼續反應10 min。

產(chǎn)品圖片

注意事項

1.該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2.必須確保使用的移液槍本身沒(méi)有殘留的支原體，盡量用新購移液器、新開(kāi)封的槍頭操作。整個(gè)操作過(guò)程，佩戴kouzhao不要開(kāi)口說(shuō)話(huà)。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽(yáng)性。
3.最好使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽(yáng)性支原體等。如果沒(méi)有帶濾芯的吸頭，至少應該使用新開(kāi)封的吸頭。
4.檢測過(guò)程中，用過(guò)的各類(lèi)吸頭、離心管務(wù)必小心處理，應裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶?jì)?。反應后?/span>PCR管，不要開(kāi)蓋，用過(guò)后將其用自封袋密閉，扔到遠離細胞房的獨立垃圾桶內。
5.如果細胞被支原體污染，可以選購本公司或其他供應商提供的去除試劑盡早去除。
6.如待測樣品是低溫保存的血漿、血清、臍帶血、胰酶、抗生素、未使用的培養液等，這類(lèi)樣品中支原體含量較低，為了保證支原體DNA的檢出率，可通過(guò)離心濃縮提高樣品DNA濃度，再進(jìn)行檢測。

7.如果反應后，發(fā)現個(gè)別樣品的顏色介于陽(yáng)性和陰性之間（正常這種情況應該概率很低，如果經(jīng)常出現，樣品中可能含有可干擾正常指示效果的物質(zhì)，必須先去除。），可以將這些樣品繼續 61℃反應 10  min。10  min后，如果其顏色仍然與陽(yáng)性對照的顏色不同，該樣品應該判為陰性。這種可疑樣品建議用相同試劑盒或者不同原理的其他試劑盒（如本公司的《PCR 法支原體檢測試劑盒》貨號：AC16L064、《發(fā)光法支原體檢測試劑盒》貨號：AC16L062 、《探針?lè )ㄖгw檢測試劑盒》貨號：AC16L068）進(jìn)行復檢。
8.反應后，請勿打開(kāi)反應管的蓋子，否則有可能造成檢測環(huán)境的污染。
表2：Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細胞培養專(zhuān)用)的優(yōu)勢

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