Bradford蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品描述
　　Bradford 法蛋白定量是基于考馬斯亮藍G-250與蛋白質(zhì)結合后， 產(chǎn)生藍色化合物，反應迅速而穩定。反應化合物在465-595nm處有大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系，因此可通過(guò)檢測595nm的光吸收值的大小來(lái)計算蛋白的含量。
訂購信息

產(chǎn)品組分

保存方法
　　冰袋運輸，Bradford試劑A 2-8°C保存，蛋白標準品-20°C保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
方案一、試管檢測
1、試劑準備
（1）取適量5mg/ml蛋白標準，PBS稀釋至終濃度為2mg/ml蛋白標準。配制后可立即使用，也可以-20°C長(cháng)期保存。
（2）稀釋BSA標準品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。
表1：BSA標準品配制表

（3）取干凈的試管，將30μl稀釋好的BSA標準品分別加到作好標記的試管中。
（4）取干凈的試管，分別加入30μl待測蛋白樣品(原液或稀釋液)，并作好標記，推薦每個(gè)樣品做2-3 個(gè)平行反應。
2、樣品孵育及檢測
（1）向上一步驟配制的不同濃度的標準品BSA和待測樣品試管中各加入1.5ml Bradford蛋白定量試劑，充分混勻，室溫放置10分鐘。
（2）用分光光度計測定595nm 處的吸光值。
3、制作標準曲線(xiàn)和計算樣品濃度
（1）利用Excel或其他軟件繪制標準曲線(xiàn)，并計算樣品中的蛋白濃度。
（2）如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內，請重新稀釋樣品后再次測定。
方案二、微孔檢測
1、試劑準備
（1）將按表2稀釋好的BSA標準品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各5μl分別加到作好標記的96孔板微孔中。推薦每個(gè)樣品做2-3 個(gè)平行反應。
表2：BSA標準品配制表

2、樣品孵育及檢測
（1）每孔加入250μl Bradford蛋白定量試劑，充分混勻，蓋上96孔板蓋，室溫放置10 分鐘。
（2）用酶標儀測定595nm處的吸光值。
3、制作標準曲線(xiàn)和計算樣品濃度
（1）繪制標準曲線(xiàn)，計算樣品中的蛋白濃度。
（2）如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內，請重新稀釋樣品后再次測定。
注意事項
1、樣品中若含有去垢劑會(huì )影響檢測結果，請試用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒；
2、要得到更為準確的蛋白濃度結果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復孔, 每次均應做標準曲線(xiàn)；
3、需準備 37°C水浴或溫箱、酶標儀或普通分光光度計，測定波長(cháng)為 465-595nm 之間，595nm合適。酶標儀需與 96孔酶標板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時(shí)，試劑盒測定的樣品數量會(huì )因此而減少。使用溫箱孵育時(shí)，應注意防止因水份蒸發(fā)影響檢測結果。
4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。