潮霉素B (Hygromycin B)

潮霉素B (Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類(lèi)抗生素，通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細胞。

大腸桿菌（ Escherichia coli.）來(lái)源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉移酶，將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來(lái)篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Cat：AB11L234)，Zeocin（Cat：AB11L251）和Blasticidin S（Cat：AB11L221）聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽(yáng)性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入yin病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅蟲(chóng)功能。

訂購信息

運輸與保存

常溫運輸。4℃保存，有效期48個(gè)月。

技術(shù)參數

1.CAS：31282-04-9

2.溶解性：100mg/ml in Water

3.純度：≥90%

4.酶活/效價(jià)：≥950U/mg

5.結構式：

使用方法

1.常用篩選濃度

【注】：潮霉素B用來(lái)篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類(lèi)型，培養基，生長(cháng)條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（kill curve），即劑量反應性曲線(xiàn)，來(lái)確定最佳篩選濃度。一般而言，哺乳動(dòng)物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2.殺滅曲線(xiàn)的建立

【注】：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素zui低濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（劑量反應曲線(xiàn)）來(lái)實(shí)現，至少選擇5個(gè)濃度。

（1）第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過(guò)夜；注：對于需要更高密度來(lái)檢測活力的細胞，可增加接種量。

（2）根據細胞類(lèi)型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

（3）第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

（4）接下來(lái)每3-4 d更換新的含藥物培養基。

（5）按照固定的周期（如每2 d）進(jìn)行活細胞計數來(lái)確定阻止未轉染細胞生長(cháng)的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10 d）內能夠殺死絕大多數細胞的zui低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。

（3）穩定轉染細胞的篩選

（1）轉染48 h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來(lái)傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

【注】：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果好。則當細胞過(guò)于稠密，其效率會(huì )降低。為了得到較好的篩選效果，將細胞稀釋至豐度不超過(guò)25%。

（2）每隔3-4 d更換含有藥物的篩選培養液。

（3）篩選7 d后觀(guān)察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細胞類(lèi)型，轉染，以及篩選效果。

（4）挑取并轉移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7 d。

（5）之后更換正常培養基培養即可。

注意事項

1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來(lái)自E. Coli.之外，還發(fā)現于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

3.本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。

4.為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

5.以上數據均來(lái)自公開(kāi)文獻, 李記生物暫未本產(chǎn)品進(jìn)行獨立驗證, 僅供參考。