Anti-His免疫磁珠

Anti-His免疫磁珠將高質(zhì)量的鼠源單克隆Anti-His抗體共價(jià)偶聯(lián)在超順磁性納米微球表面,可特異性地與動(dòng)植物或微生物裂解液、血清、腹水等中含有 HIS 標簽的蛋白結合，從而用于帶有 His 標簽的融合蛋白或其蛋白復合物的免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(Co-IP)或純化。Anti-His Magnetic Beads (Anti-HIS 磁珠)，可以特異性地結合 HIS 標簽融合蛋白，并可以借助磁力架等磁分離設備非常便捷地應用于帶有 HIS 標簽的融合蛋白或其蛋白復合物的免疫沉淀或純化等實(shí)驗。

產(chǎn)品優(yōu)勢

1.具有高效的蛋白結合能力。

2.超低非特異性吸附的性能。

3.配合磁力架操作省時(shí)、簡(jiǎn)便、溫和。

4.產(chǎn)品穩定性高。

訂購信息

常溫運輸。4℃保存，有效期 24 個(gè)月。

技術(shù)參數

貼壁細胞樣品

1.移去培養基，用 PBS 洗細胞兩次。

2.收集細胞至 1.5 mL EP 管內，按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer，同時(shí)加入 PMSF 等相應的抑制劑，混勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間混勻幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清液，置于冰上以備后續實(shí)驗（或置于-80 ℃長(cháng)期保存）。

表 1.培養皿 IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。

2.用 PBS 洗細胞一次，即用 PBS 將細胞團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。

3.用預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細胞。每 50mg 細胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時(shí)加入 PMSF 等相應的抑制劑，混勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間混勻幾次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集上清液，置于冰上以備后續實(shí)驗（或置于-80 ℃長(cháng)期保存）。

血清樣品

一般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為 50~150 µg/mL，置于冰上備用（或置于-20 ℃長(cháng)期保存）。

免疫沉淀

【注】：為保證磁珠均勻分布，使用前通過(guò)反復顛倒或輕微渦旋混勻瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-His Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心管中。

2.向磁珠中加入 500 µL 預冷 PBS，輕柔混勻。

3.將離心管放入磁力架中收集磁珠到離心管的一邊。去除上清。

4.向離心管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數次或輕微渦旋混勻 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。

5.將制備好含有 GST 標記蛋白加入裝有磁珠的離心管中，保持混勻室溫下孵育 1-2 h。

6.用磁力架收集磁珠，除去未結合的樣品，保存以備分析。

7.向離心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻。收集磁珠，棄上清。再重復洗兩次。

8.變性洗脫：向離心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置于 100℃水浴或者金屬浴中加熱 10 min。通過(guò)磁力架分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。

【注】：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脫方式。

低 pH 洗脫：向離心管中加入 100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵育離心管 5-10 min。通過(guò)磁力分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。每 100 µL 洗出液中加入 10 µL Neutralization Buffer 來(lái)中和低 pH。

注意事項

1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.請勿高速離心、干燥或冷凍磁珠，這些操作會(huì )導致磁珠聚集而降低結合能力。

3.IP 實(shí)驗中不同類(lèi)型的抗體與抗原結合的親和性是有區別的，抗體與抗原結合還會(huì )受到 IP Lysis/WashBuffer 的影響，因此，如使用本實(shí)驗步驟不能獲得最佳的實(shí)驗結果，可自行優(yōu)化操作細節或者篩選及配制緩沖液進(jìn)行實(shí)驗，推薦使用李記生物的相關(guān)產(chǎn)品，參照相關(guān)產(chǎn)品推薦。

4.微球使用前應充分振蕩均勻。微球應保存在儲存溶液中，防止干燥。

相關(guān)產(chǎn)品推薦

1XPBS（無(wú)菌）（貨號：AC08L011）

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蛋白示蹤上樣緩沖液（5 x）（貨號： AP14L036）