如何正確的進(jìn)行ELISA測定操作

　　一、臨床標本的收集和保存

　　用于ELISA測定的臨床標本zui為常用的是血清（漿），有時(shí)因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集，要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì )對測定結果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點(diǎn)之間，會(huì )有一峰值出現：生長(cháng)激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測定此類(lèi)激素時(shí)，有必要在密切相連的時(shí)間間隔內采取數份血樣本，以其中間值為測定值。又如當從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí)，血清中腎素活性將出現明顯增高。再如治療藥物的檢測，應根據藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的zui適時(shí)間抽血檢測。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢測的血清標本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位方面的影響，只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面：

　?。?）要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色。

　?。?）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長(cháng)，其所分泌的一些酶可能會(huì )對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì )對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

　?。?）血清標本如是以無(wú)菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長(cháng)時(shí)間保存，應在-70℃以下。

　?。?）冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。

　?。?）標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應離心沉淀后取上清檢測。