細胞凍存液原理及配制方法

　　細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外，減少細胞內冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時(shí)間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。
 

　　細胞凍存是細胞培養、引種、保種和保證實(shí)驗順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細胞建株和建系中，及時(shí)凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是不可少的實(shí)驗操作。因為在沒(méi)有建立一個(gè)穩定的細胞系或穩定分泌抗體的細胞系的時(shí)候，細胞的培養過(guò)程中隨時(shí)可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導致實(shí)驗失敗，如果沒(méi)有原始細胞的凍存，則因為上述的意外而前功盡棄。
 

　　細胞凍存常用凍存液的成分如下：
 

　　20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養液；或90%血清(FBS)、10%DMSO，更可防止細胞內冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過(guò)濾后分裝保存備用。
 

　　注意事項：
 

　　1.DMSO 不用高壓滅菌;DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過(guò)濾除菌。
 

　　2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存。
 

　　3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
 

　　DMSO在凍存液中的作用： DMSO在4℃時(shí)對細胞無(wú)明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過(guò)細胞膜，降低細胞外未結冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內水分也不會(huì )過(guò)分外滲，避免了細胞過(guò)分脫水皺縮；DMSO與水分子結合，可使冰點(diǎn)下降，減少細胞內冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。