細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種技術(shù)
更新時(shí)間:2022-12-31 點(diǎn)擊次數:763
細胞轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。隨著(zhù)基因與蛋白功能研究的深入,轉染目前已成為實(shí)驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。
常規轉染技術(shù)可分為兩大類(lèi),一類(lèi)是瞬時(shí)轉染,一類(lèi)是穩定轉染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細胞中可存在多個(gè)拷貝數,產(chǎn)生高水平的表達,但通常只持續幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調控元件的分析。一般來(lái)說(shuō),超螺旋質(zhì)粒DNA轉染效率較高,在轉染后24-72小時(shí)內(依賴(lài)于各種不同的構建)分析結果,常常用到一些報告系統如熒光蛋白,β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測。后者也稱(chēng)穩定轉染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線(xiàn)性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高,外源DNA整合到染色體中概率很小,大約1/104轉染細胞能整合,通常需要通過(guò)一些選擇性標記,如來(lái)氨丙基轉移酶(APH;新霉素抗性基因)、潮霉素B磷酸轉移酶(HPH)、胸苷激酶(TK)等反復篩選,得到穩定轉染的同源細胞系。
轉染大致可分為物理介導、化學(xué)介導和生物介導三類(lèi)途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過(guò)物理方法將基因導入細胞的范例;化學(xué)介導方法很多,如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導的技術(shù);生物介導方法,有較為原始的原生質(zhì)體轉染,和現在比較多見(jiàn)的各種病毒介導的轉染技術(shù)。