慢病毒的感染效率受哪些因素影響？

   慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱(chēng)結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類(lèi)型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著(zhù)特點(diǎn)是感染個(gè)體在出現典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長(cháng)達數年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱(chēng)為慢病毒。慢病毒包裝系統一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所有輔助蛋白。

　　慢病毒感染效率受到多種因素的影響，首先，考慮病毒包裝制備是否存在問(wèn)題，比如外源基因是否正確，病毒滴度是否合格等。其次，考慮病毒運輸和保存方式是否得當，解凍病毒一定要在冰上進(jìn)行，避免反復凍融，否則會(huì )影響病毒滴度；-80℃保存半年以上需要重新測定滴度。細胞狀態(tài)對于慢病毒轉導效率也具有很大的影響，良好的生長(cháng)狀態(tài)是達到高感染效率的保證，一般選擇細胞形態(tài)較好、輪廓清晰、處于對數生長(cháng)期的細胞進(jìn)行感染可提高感染效率。臨床慢病毒轉導用途關(guān)于慢病毒轉導的臨床實(shí)驗。

　　基因治療的臨床效果取決于細胞的高水平轉導,雖可通過(guò)二次轉導或提高感染復數(multiplicityofinfection,MOI)增加轉導率,但延長(cháng)體外培養時(shí)間可誘導干細胞進(jìn)入細胞周期而影響其分化增殖能力;提高gan ran復數會(huì )提高插入突變風(fēng)險和增加生產(chǎn)成本。因此,在不斷改造慢病毒以增加安全性的同時(shí),提高病毒轉導效率是亟待解決的難題。慢病毒轉導過(guò)程的限制因素包括病毒黏附、入胞、細胞運輸及固有免疫作用。通過(guò)引入異源病毒包膜構建新的偽型載體和/或在轉導過(guò)程中添加病毒轉導增強劑(transductionenhancers,TEs),可有效克服LVVs轉導的障礙,增加轉導細胞比例,從而達到臨床需要的轉導水平。