SDS細胞裂解液（帶抑制劑）

產(chǎn)品描述
　　SDS細胞裂解液（帶抑制劑）是一種比較強烈的細胞組織裂解液，通過(guò)陰離子去垢劑SDS促進(jìn)細胞膜的崩解，特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解，有利于膜蛋白，胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。本產(chǎn)品具有有強烈的蛋白變性作用，不能用于非變性蛋白方面的研究。本產(chǎn)品裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、染色質(zhì)免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation，ChIP)等。
訂購信息

產(chǎn)品組分

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 對于培養細胞樣品

對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2秒后，細胞就會(huì )被裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10 min。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬(wàn)細胞/管，然后再裂解。充分裂解后應沒(méi)有明顯的細胞沉淀。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘。具體SDS細胞裂解液的使用量參照表1.
(3) 充分裂解后，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western和ChIP等操作。
2. 對于組織樣品：
(1) 把組織*切成細小的碎片。
(2) 融解SDS細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20毫克組織加入150—250μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。具體SDS細胞裂解液的用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。如果用于ChIP，初步裂解后需在冰浴上繼續裂解10分鐘。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western和ChIP等操作。
注意事項

表1 :SDS細胞裂解液的使用量

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