Western/IP細胞裂解液（帶抑制劑）

產(chǎn)品描述
　　Western及IP裂解液是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液，對胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用，有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。適用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
訂購信息

產(chǎn)品組分

保存方法
　　裂解液4℃保存，其余-20℃保存，保質(zhì)期一年。
使用方法
1. 對于培養細胞樣品
(1) 融解Western及IP裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
(2) 細胞裂解
對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1~2 s后，細胞就會(huì )被裂解。
對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒(méi)有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50~100萬(wàn)細胞/管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(3) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
2. 對于組織樣品
(1) 把組織*切成細小的碎片；
(2) 融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
(3) 按照每20 mg組織加入100~200 μL裂解液的比例加入裂解液，如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。具體Western/IP裂解液的使用量參照表1。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。  
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jìn)行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項

2. 通常6孔板每孔細胞加入100 μL裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150 μL或200 μL。
3. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實(shí)驗。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
表1： Western/IP細胞裂解液的使用量參考表

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