Blasticidin S HCl (滅瘟素S)

Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來(lái)源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類(lèi)抗生素，中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散，一般為鹽酸鹽。

Blasticidin S常用于篩選攜帶bsr/BSD/bls基因(常標記為bsrr/bsdr/Blastr)質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩定轉染細胞株，具有快速而強效的作用模式，很低的抗生素濃度便能使未攜帶抗性基因的細胞迅速死亡。

本產(chǎn)品10mg/ml包裝配制在HEPES (pH7.4)緩沖溶液中，濃度為10mg/ml，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，可以直接用于細胞培養。本產(chǎn)品10mg和50mg包裝為粉末裝。

Blasticidin S通過(guò)干擾核糖體結合肽段而特異性抑制原核細胞或真核細胞的蛋白合成。目前已經(jīng)有3種滅瘟素耐受基因，一種是分離自鏈霉菌(Streptoverticillum sp.)的乙?；D移酶基因bls；另外兩種是脫氨酶基因，分別是從蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)中分離的bsr和從土霉菌(Aspergillus terreus)中分離的BSD基因。bsr和BSD基因是zui常用的篩選標志，用于哺乳動(dòng)物和植物細胞的穩定細胞株篩選。Blasticidin S也可用于大腸桿菌(E. coli)等原核細胞的篩選。

Blasticidin S具有快速而強效的作用模式，在很低的抗生素濃度下便能導致細胞快速死亡。大腸桿菌通常對50μg/ml的濃度敏感，而哺乳動(dòng)物細胞對低至2-10µg/ml的濃度敏感。細胞死亡迅速發(fā)生，通?？稍诓坏揭恢艿臅r(shí)間內即可形成具有Blasticidin S抗性的穩定哺乳動(dòng)物細胞系。

訂購信息

常溫運輸。4℃保存，有效期36個(gè)月。

技術(shù)參數

1.CAS：3513-03-9

2.分子式：C17H26N8O5·HCl

3.分子量：458.9

4.純度：>95%

5.結構式：

使用方法

1.推薦工作濃度

推薦的作用于哺乳動(dòng)物細胞的Blasticidin S濃度一般為1-50μg/ml，但最佳工作濃度需要通過(guò)劑量反應曲線(xiàn)來(lái)確定。

表1.部分常見(jiàn)哺乳動(dòng)物細胞的推薦工作濃度表

2.Blasticidin S劑量反應曲線(xiàn)的確定
　　Blasticidin S的有效篩選濃度與細胞類(lèi)型、生長(cháng)狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關(guān)。為了篩選到具有Blasticidin S抗性的穩定細胞株，需要確定殺死未轉染/感染宿主細胞所需的Blasticidin S的zui低濃度，可以通過(guò)實(shí)驗來(lái)確定適合自身實(shí)驗體系的劑量反應曲線(xiàn)(dose-response curve or kill curve)。
（1）第一天：將正常的細胞按照約25%的密度接種在適宜的細胞培養板上，于細胞培養箱內培養過(guò)夜。
（2）第二天：將培養過(guò)夜的細胞培養基換成新鮮的含不同濃度Blasticidin S的篩選用培養基，Blasticidin S濃度可以設置為0、2、4、6、8和10μg/ml等，每個(gè)濃度設置2個(gè)復孔，于細胞培養箱內繼續培養。注：也可以根據自己的實(shí)驗體系，設置不同的濃度梯度。
（3）每3-4 d更換新鮮的篩選培養基，并觀(guān)察存活細胞的比例。
（4）選擇在加入Blasticidin S后7-10天殺死大多數細胞的zui低濃度為最佳篩選濃度。
3.哺乳動(dòng)物穩定表達細胞株的篩選
　　轉染含有bsr或BSD基因的質(zhì)?；蛘吒腥竞性摶虻牟《竞?，即可篩選穩定表達株。
（1）細胞轉染或感染48h后，將細胞置于含有適當濃度Blasticidin S的新鮮培養基中培養，此為處理組。
【注】：當細胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用zui明顯。細胞過(guò)于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì )明顯下降，所以細胞的密度最好不超過(guò)25%。建議同時(shí)做一個(gè)正常細胞的對照組。轉染或感染48 h后，如果細胞過(guò)密也可以消化后重新接種細胞，培養過(guò)夜后即可進(jìn)行Blasticidin S篩選。
（2）每3-4 d去除培養基，加入含Blasticidin S的新鮮培養基。

（3）篩選7-10 d后，對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達bsr或BSD基因的細胞。然后根據實(shí)驗目的進(jìn)行多克隆或單克隆細胞的篩選。根據宿主細胞種類(lèi)和轉染/篩選效率，集落形成可能需要一周或更多的時(shí)間。
（4）克隆形成后，挑取并轉移5-10個(gè)抗性克隆到35mm細胞培養板中，加入選擇培養基維持培養7 d。隨后用細胞毒性實(shí)驗進(jìn)行檢測。

注意事項

1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域

2.用于細胞實(shí)驗，溶解后，須用一次性針頭濾器過(guò)濾除菌。

3.抗生素不穩定，請在有效期內盡快使用。

4.以上數據均來(lái)自公開(kāi)文獻, 李記生物暫未本產(chǎn)品進(jìn)行獨立驗證, 僅供參考。

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