Evagreen  ( 20 × in water )

產(chǎn)品描述
Evagreen 是一種用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）的DNA 結合染料。該染料的諸多優(yōu)點(diǎn)使它遠勝于SYBR Green I。除了有相似的光譜特性，Evagreen有三個(gè)主要特點(diǎn)使它區別于SYBR Green I 。
首先，Evagreen對PCR的抑制性遠小于SYBR Green I。因此，使用Evagreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗可以使用快速PCR步驟。同時(shí)，Evagreen在實(shí)驗中可以使用較高的濃度，從而獲得遠強于SYBR Green I擴增信號。較高濃度的Evagreen也消除了“染料重分布"的缺陷，使Evagreen既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲線(xiàn)分析（HRM）。該分析正被越來(lái)越多的用于PCR后的基因分型和異源雙鏈分析。由于SYBR Green I對PCR的抑制性，從而要求其使用濃度必須很低，因此SYBR Green I無(wú)法解決由低濃度造成的染料重分布問(wèn)題，既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同時(shí)，染料重分布問(wèn)題也可能影響常規熔解曲線(xiàn)的可靠性，因為低熔點(diǎn)的DNA鏈可能由于這種原因而無(wú)法檢測到。    
第二，Evagreen的穩定性強。在正常的儲存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì )被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里，也可以反復凍融。與之相反，SYBR Green I不穩定而且降解后對PCR抑制性更強。
第三，Evagreen降低了細胞膜透性，因而比SYBR Green 1更加安全。獨立實(shí)驗室的測試結果顯示，Evagreen既沒(méi)有誘變性也沒(méi)有細胞毒性。相反，雖然SYBR Green I本身誘變性很弱，但它在細胞中可能抑制了正常DNA的修復機制，使其有誘變增強作用?？紤]到PCR的廣泛使用，其安全性應該足夠重視。
訂購信息

產(chǎn)品參數
λabs/λem = 500/530 nm (結合DNA)
λabs = 471 nm (未結合DNA)
運輸與保存
藍冰運輸。4℃短期避光保存，有效期12個(gè)月；-20℃長(cháng)期避光保存，有效期24個(gè)月。
使用方法
如下建立實(shí)驗體系：（僅供參考）

實(shí)驗目的
實(shí)時(shí)定量PCR檢測20× Evagreen
主要試劑
1. Prime
hβ-actin：
forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’
reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’
2. HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)
3. Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)
4. BSA: Sigma(A7030)
5. 10 mM dNTPs: Takara(4019)
實(shí)驗方案
1. 配制2× Evagreen Buffer

2. 配制 q-PCR反應體系

【注】：① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同種類(lèi)的 DNA模板中含有的靶基因的拷貝數不同，必要時(shí)可進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)_定合適的 DNA 模板添加量。cDNA作為模板時(shí)的添加量不要超過(guò) PCR 反應液總體積的 10%。②引物終濃度一般控制在0.1-0.5 μM范圍內。
3. 實(shí)驗分組：標準對照樣品孔（陽(yáng)性對照）、檢測樣品孔、空白對照孔（陰性對照）共三組，同時(shí)進(jìn)行檢測，分別進(jìn)行三次平行實(shí)驗。
4. 混勻離心、上機進(jìn)行熒光定量PCR（儀器為Roche：LC96）。
PCR程序：

5. 保存數據，判斷樣本質(zhì)量：
A．檢測樣品與標準品之間的Ct值差
B．檢測樣品與標準品之間的熒光強度差
檢測結果需達到：以上兩組檢測指標無(wú)顯著(zhù)性差異
注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

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