EZ Trans Lipo細胞轉染試劑（脂質(zhì)體）

產(chǎn)品描述
EZ Trans Lipo細胞轉染試劑（脂質(zhì)體）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“EZ Trans Lipo"）為李記生物新研發(fā)的細胞轉染試劑，EZ Trans Lipo以納米脂質(zhì)體包裹核酸通過(guò)特殊遞送機制，把外源DNA、RNA、siRNA轉入各類(lèi)細胞，能轉染貼壁細胞、懸浮細胞，還可用于siRNA和shRNA的基因敲除實(shí)驗及基因表達研究。
經(jīng)過(guò)對近百種細胞對比測試，EZ Trans Lipo在絕大部分受檢細胞的轉染效率、細胞毒性表現均與進(jìn)口型產(chǎn)品一致或更優(yōu)；具備轉染效率高、細胞毒性低、適用細胞廣、性?xún)r(jià)比高等優(yōu)點(diǎn)。
訂購信息

運輸與保存
藍冰運輸。4℃保存，有效期12個(gè)月。
使用方法
貼壁細胞（以293T細胞、96孔板為例）
1.細胞準備
轉染前一天用1酶消化、鋪板，轉染當天細胞密度達到3.0x10⁵ 個(gè)細胞/mL時(shí)可進(jìn)行轉染, 細胞匯合度達到70%-80%，保證活細胞>90%。
2.準備DNA-EZ Trans Lipo復合物
（1）取兩支無(wú)菌EP管(平行樣)，兩個(gè)EP管各加入5 μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養液，然后每一管各加入EZ Trans Lipo轉染試劑0.15 μL，輕微吹吸使混和均勻。
（2）取一支無(wú)菌EP管，加入10 μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養液，然后加入待轉DNA或質(zhì)粒，確保最終DNA量為0.2 μg，輕微吹吸使混和均勻。
（3）分別吸取將上述含有DNA的培養液5μL加入稀釋好的EZ Trans Lipo的兩個(gè)EP管中, 輕輕吹打、晃動(dòng)使混和均勻，室溫靜置20 min形成DNA-EZ Trans Lipo 復合物（室溫條件4 h內性質(zhì)穩定）。
3.轉染細胞
把DNA-EZ Trans Lipo 復合物全部加入到96孔板貼壁培養的293細胞中（試劑有重復樣）。逐滴分散加入，輕微晃動(dòng)。
4.細胞檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復合物的細胞在 37℃ 培養1-3 d（無(wú)需特意更換培養液），根據實(shí)驗設計實(shí)時(shí)觀(guān)察或收獲細胞檢測。
 
表1：不同培養體積對應的待轉DNA、EZ Trans、稀釋液用量

 
 
 
懸浮細胞（以293FT細胞、1mL培養體積為例）
1.細胞準備
細胞進(jìn)行轉染當天，細胞密度達到2-2.5x10⁶ 個(gè)/mL時(shí)可進(jìn)行轉染，細胞重懸后匯合度達到70%-80%，保證活細胞>90%。懸浮細胞細胞轉染可當天接種/鋪板, 只要細胞狀態(tài)穩定即可進(jìn)行。
2.準備DNA-EZ Trans Lipo復合物
（1）取兩支無(wú)菌EP管(平行樣)，兩個(gè)EP管各加入400μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養液, 然每一管各加入EZ Trans Lipo轉染試劑15μL，輕微吹吸使混和均勻。
（2）取一支無(wú)菌EP管，加入800μL不含抗生素和血清的MEM細胞培養液，然后加入待轉DNA或質(zhì)粒，確保最終DNA量為20μg，輕微吹吸使混和均勻。
（3）分別吸取將上述含有DNA的培養液400μL加入到稀釋好的轉染試劑培養液的兩個(gè)EP管中, 輕輕吹打、晃動(dòng)使混和均勻，室溫靜置20 min（室溫條件4 h內性質(zhì)穩定）。
3.轉染細胞
把DNA-EZ Trans Lipo復合物800μL全部加入到1 mL懸浮培養的293FT細胞中（有重復樣）。逐滴分散加入，輕微晃動(dòng)。
4.細胞檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復合物的細胞，37℃ 懸浮培養細胞1-3 d（無(wú)需特意更換培養液），根據實(shí)驗設計實(shí)時(shí)觀(guān)察或收獲細胞檢測。
注意事項
1.本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2.DNA-EZ Trans Lipo 的轉染過(guò)程不要求特意更換，但由于雙抗會(huì )影響重組蛋白的表達，為獲得最佳表達效果，建議在細胞轉染前2 h更換成不含抗生素和血清的培養基，在轉后4-6 h換回含抗生素和血清的培養基。
3.質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉染級無(wú)內毒素質(zhì)粒。通過(guò)260 nm光吸收測定DNA 濃度，260nm / 280nm比值確定 DNA 純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內）。如有可能，請通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。
4.細胞條件：使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養基沒(méi)有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的特級胎牛血清（Foetal Bovine Serum）（貨號：AC03L055）培養細胞。
5.為了減少操作誤差，上述操作步驟設定了一個(gè)重復平行樣，用戶(hù)可根據實(shí)驗室目的和實(shí)驗室條件調整。
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